T/CAICC 05-2021
中藥材中水胺硫磷的快速檢測 膠體金免疫層析法
Rapid detection of isocarbophos in Chinese medicinal materials —Colloidal gold immunochromatography
2024-01
- 標準號
- T/CAICC 05-2021
- 發布
- 2022年
- 總頁數
- 8頁
- 發布單位
- 中國團體標準
- 替代標準
- T/CAICC 05-2023
- 當前最新
- T/CAICC 05-2023
- 適用范圍
- 3 原理 本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的水胺硫磷經提取后與膠體金標記的特異性抗體結合，抑制了抗體和試紙條中檢測線（T線）上抗原的結合，從而導致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與質控線（C線）顏色深淺比較，對樣品中水胺硫磷進行定性判定。 4 試劑與材料 4.1 試劑 除另有說明外，所有試劑均為分析純，實驗室用水應符合GB/T 6682中二級水的要求。 4.1.1 甲醇（CH3OH）。 4.1.2 提取液：由膠體金免疫層析試紙條配套提供，或按照其說明書配制。 4.1.3 參考物質：水胺硫磷參考物質的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質量見表1，純度≥98%。 表1 水胺硫磷參考物質的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質量 中文名稱 英文名稱 CAS登錄號 分子式 相對分子質量 水胺硫磷 Isocarbophos 24353-61-5 C11H16NO4PS 289.3 注：或等同可溯源物質。 4.2 溶液配制 4.2.1 水胺硫磷標準儲備液（100 μg/mL）：準確稱取水胺硫磷參考物質（4.1.3）1 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇（4.1.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為100 μg/mL的水胺硫磷標準儲備液。4℃避光保存，有效期6個月。 4.2.2 水胺硫磷標準工作液（1 μg/mL）：精密移取水胺硫磷標準儲備液（100 μg/mL）（4.2.1）0.1 mL，置于10 mL容量瓶中，用甲醇（4.1.1）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1 μg/mL的水胺硫磷標準工作液。臨用新配。 4.3 材料 水胺硫磷膠體金免疫層析試紙條，適用基質為中藥材。需在陰涼、干燥、避光條件下保存。 5 儀器與設備 5.1 電子天平：感量為0.01 g。 5.2 均質器。 5.3 離心機。 5.4 氮吹儀。 5.5 渦旋儀。 5.6 移液器：10 μL~200 μL、100 μL~1000 μL。 6 分析步驟 6.1 試樣制備 取適量代表性樣品，充分均質混勻。 6.2 試樣提取 6.2.1 黨參、板藍根、黃芪、甘草樣本 稱取1 g試樣（精確至0.05 g）放入離心管中，加入6 mL提取液（4.1.2），上下振蕩30 s，3000 r/min以上離心3 min，上清液即為待測液。 6.2.2 柴胡、當歸樣本 稱取1 g試樣（精確至0.05 g）放入離心管中，加入3 mL甲醇（4.1.1），上下振蕩30 s，3000 r/min以上離心3 min；取0.6 mL上清液至離心管中，50~60℃水浴氮氣流下吹干；加入1 mL提取液（4.1.2），渦動20 s后即為待測液。 6.3 測定步驟 測試前，將未開封的試紙條恢復至室溫。吸取100 μL樣品待測液于試紙條的加樣孔中，室溫反應10 min后，直接進行結果判定。 注1：測定步驟建議按照試紙條說明書。 注2：結果判定建議使用讀數儀，讀數儀的具體使用參照儀器使用說明書。 6.4 質控試驗 每批樣品應同時進行空白試驗和加標質控試驗。 6.4.1 空白試驗 稱取空白試樣，按照6.2和6.3步驟與樣品同法操作。 6.4.2 加標質控試驗 準確稱取空白試樣1 g（精確至0.05 g）放入離心管中，加入50 μL水胺硫磷標準工作液（1 μg/mL）（4.2.2），使試樣中水胺硫磷濃度為0.05 mg/kg，按照6.2和6.3步驟與樣品同法操作。 7 結果判定 7.1 讀數儀測定 按讀數儀說明書要求操作，直接讀數并進行結果判定。 7.2 目視判定 通過對比質控線（C線）和檢測線（T線）的顏色深淺進行結果判定。目視判定示意圖見圖1。 7.2.1 無效 質控線（C線）不顯色，無論檢測線（T線）是否顯色，表明操作不正確或試紙條已失效，檢測結果無效。 7.2.2 陽性結果 質控線（C線）顯色，檢測線（T線）不顯色或顏色淺于質控線（C線），表明樣品中水胺硫磷含量高于方法檢出限，判定為陽性。 7.2.3 陰性結果 質控線（C線）顯色，檢測線（T線）顏色深于質控線（C線）或與質控線（C線）顏色基本一致，表明樣品中水胺硫磷含量低于方法檢出限，判定為陰性。 圖1 目視判定示意圖 7.3 質控試驗要求 空白試驗測定結果應為陰性，加標質控試驗測定結果應為陽性。 8 結果確認 當檢測結果為陽性時，應按照《中國藥典》指定方法標準進行確證。 9 性能指標 9.1 檢出限：0.05 mg/kg。 9.2 靈敏度：≥95%。 9.3 特異性：≥90%。 9.4 假陰性率：≤5%。 9.5 假陽性率：≤10%。 注：性能指標計算方法見附錄A。 10 其他 本方法所述試劑、試紙條信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不做限定。方法使用者應使用經過驗證的滿足本方法規定的各項性能指標的試劑、試紙條。 本方法使用試紙條可能與甲基異柳磷等有機磷類農藥存在交叉反應，當結果判定為陽性時應對結果進行確證。