X-Gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopy-ranoside),用二甲基甲酰胺溶解,配成 40 mg/ml 儲存液,-20°C 保存。5. 磁珠洗液 1:0.1 mol/L NaOH,0.1 mol/L NaCl。磁珠洗液 2:0.1 mol/L NaCl。6....
當外源基因插入時,二者溶為一體后,有β-半乳糖苷酶表達,在生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(x-gal)培養基中形成蘭色菌落。而當有外源基因插入到多克隆原點,從而造成插入失活,而使 lacZ基因不表達而形成白色菌斑。 通過顏色不同而區分重組子和非重組子。位于不同載體或染色體上的...
在IPTG(異丙基硫代β-D-半乳糖苷)的誘導下,β半乳糖苷酶能將X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和藍色的底物5-溴-4-靛藍。因此,任何攜帶lacZ基因的質粒載體轉化到β半乳糖苷酶突變的大腸桿菌細胞后,都會在涂有IPTG和X-Gal的培養基平板上形成藍色菌落。...
2、 互補法:現在使用的許多載體(如PUC系列)有含有一個大腸桿菌DNA的短區段,其中含有β-半乳糖苷酸基因(lacZ)的調控序列和頭146個氨基酸偏碼區。這個偏碼區中插入一個多克隆位點。受體菌則含編碼β-半乳糖苷酶C端aa的序列。當外源基因插入時,二者溶為一體后,有β-半乳糖苷酶表達, 在生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(x-gal)培養基中形成蘭色菌落。...
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