步驟 | 服務內容 | 服務描述 |
1 | 實驗方案設計 | 根據客戶所需敲除基因的需求,設計實驗方案,可以根據客戶需求定制服務 |
2 | GFP-CRISPR/Cas9 質粒設計合成 | 根據客戶提供的待沉默基因序列,設計GFP-CRISPR/Cas9 質粒并合成質粒 |
3 | 病毒同源重組 | 將攜帶目的基因片段的穿梭質粒線性化后與腺病毒大骨架質粒共轉入在特定的大腸桿菌中進行同源重組,由于腺病毒骨架質粒是氨芐抗性,而與穿梭質粒同源重組后,氨芐抗性丟失,同時表達卡那霉素抗性,因此,通過抗性的變化可篩選出腺病毒載體骨架重組子,挑取重組子進行酶切鑒定,挑選酶切鑒定正確的克隆,進行下一步腺病毒載體的包裝。 |
4 | 病毒包裝 | 將篩選到的重組腺病毒運用脂質體法轉染到細胞中,由于腺病毒載體基因組中的早期基因E1缺失,利用帶有E1基因的細胞作為包裝細胞,一至兩周即可包裝出E1缺失的腺病毒載體,通過倍比擴增,富集病毒顆粒。對絕大多數的細胞株可以達到近乎100%的感染效率。 |
5 | 結果交付 | 交付具有高感染效率的病毒;被病毒感染的穩轉細胞系;(還可提供GFP-CRISPR/Cas9 質粒) |
| 實驗報告 | 包含上述每個步驟的詳細報告,所用試劑,實驗耗材等信息;包含病毒感染報告。 |