酚試劑（Lowry）法測血清蛋白質(zhì)含量
一、 相關(guān)理論
1、 血清（漿）蛋白質(zhì)是血清（漿）固體成分中含量最多、組成復(fù)雜、功能廣泛的一類化和物。
2、 血清（漿）蛋白質(zhì)的分類：
目前已研究的有300 余種，已分離提純的有100 余種，大部分在肝臟合成。
1） 鹽析法可將血漿蛋白分為白蛋白（Albumin, Alb 或
A）和球蛋白（Globulin, G）2 種
2） 醋酸纖維素薄膜電泳可將血清蛋白分為白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5 種
3） 瓊脂糖凝膠電泳可分為13 種
4） 聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）可分為30 多種
5） SDS-PAGE 可分為300 多種。
3、 血清（漿）蛋白質(zhì)的功能：
1） 維持血漿滲透壓 2）運(yùn)輸作用
3） 營養(yǎng)作用 4）緩沖作用
5）免疫作用 6）凝血作用
7）催化作用
4、 測定蛋白質(zhì)含量的意義：
1） 實(shí)驗(yàn)室測定蛋白濃度可推測蛋白質(zhì)的總量和純度
2） 農(nóng)牧業(yè)、食品加工業(yè)和發(fā)酵工業(yè)蛋白質(zhì)定量分析也是一種重要手段
3） 在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，人體體液中總蛋白質(zhì)和某些特定蛋白質(zhì)的測定，可作為疾病診斷治療和病程觀察的重要指標(biāo)
二、 常用測定方法（總蛋白）
1、 凱氏（Kjeldahl）微量定氮法：
1） 原理：在生物樣品中，蛋白質(zhì)含氮量相對恒定，為16%，即1 克氮相當(dāng)于6.25 克蛋白質(zhì)，由于其它非蛋
白質(zhì)含氮化合物所占的氮量甚微，故可通過測定樣品中的含氮量來推算其蛋白質(zhì)含量。
2） 特點(diǎn)：歷史悠久（1883 年），結(jié)果較準(zhǔn)，但方法復(fù)雜、費(fèi)時(shí)。一般不用于常規(guī)檢測。
2、 雙縮脲法：
1） 原理：利用蛋白質(zhì)肽鍵在堿性溶液中與Cu++作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物（雙縮脲反應(yīng)），在一定范圍內(nèi)，顏色反應(yīng)強(qiáng)度與蛋白質(zhì)含量成正比。
2） 特點(diǎn)：簡單、精密、準(zhǔn)確（干擾因素較少），為首選方法，但靈敏度稍差（最低測定值 100ug）。
3、 酚試劑法：
1） 原理：Folin 1921 年首創(chuàng)，利用蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基（酚基）還原酚試劑（磷鎢酸-磷鉬酸）起藍(lán)色反應(yīng)。1951 年，Lowry 對此法進(jìn)行了改進(jìn)，先于標(biāo)本中加堿性銅試劑，再與酚試劑反應(yīng)，提高了靈敏度。
2） 特點(diǎn)：靈敏度高（最低測定值 1ug），但易受還原性物質(zhì)的干擾。
4、 紫外分光光度法：
1） 原理：利用蛋白質(zhì)分子中色氨酸、酪氨酸殘基在280nm 由吸收峰，進(jìn)行比色測定。
2） 特點(diǎn)：靈敏度較高（最低測定值 10ug），操作簡單，但儀器價(jià)格昂貴，易受其它因素干擾（尿素、膽紅素），需將蛋白質(zhì)分離純化后再測。
5、 染料結(jié)合法：
1） 原理：酸性情況下，帶正電的蛋白質(zhì)與帶負(fù)電的染料（如考馬斯亮藍(lán)G-250）結(jié)合呈現(xiàn)一定的顏色。
2） 特點(diǎn)：靈敏度高（最低測定值 1ug），操作簡單，干擾因素較少但特異性不高。
三、 實(shí)驗(yàn)：酚試劑（Lowry）法測血清（總）蛋白質(zhì)含量
1、 目的及要求
1） 掌握酚試劑法測血清蛋白質(zhì)的原理
2） 掌握制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法
2、 原理
1） 堿性條件下，蛋白質(zhì)（血清）+銅生成蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物
2） 蛋白質(zhì)-銅復(fù)合物使磷鎢酸-磷鉬酸還原，生成藍(lán)色物質(zhì)
3、 試劑（略）
4、 操作
1） 血清的稀釋（1:500）
2） 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：按下表操作（單位：ml）
混勻，30min 后，以第1 管為空白管，在650nm 處比色，讀取各管光密度，并以其為縱坐標(biāo)，各管蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5、 計(jì)算
1） 以A 測讀數(shù)查標(biāo)準(zhǔn)曲線求得血清蛋白質(zhì)含量
2） 以第6 管為標(biāo)準(zhǔn)管，計(jì)算：
6、 注意事項(xiàng)
1） 加入酚試劑時(shí)動(dòng)作要快并立即搖勻，不應(yīng)出現(xiàn)混濁
2） 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：3、5、7 管平行，各管A 之差不得超過0.005，否則刪去，取平均值；最好呈45o 直線。
7、 臨床意義
1） 總蛋白增加：血液濃縮（嚴(yán)重腹瀉、嘔吐、高熱、休克）；合成增多（多發(fā)性骨髓瘤G）
2） 總蛋白減少
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焦點(diǎn)事件
