藥物的鑒別技術介紹--化學鑒定法
化學鑒別法系指根據藥物與化學試劑在一定條件下發生離子反應或官能團反應,產生不同顏色、生成不同沉淀、呈現不同熒光或放出不同氣體等現象,從而作出定性檢測結論。如果供試品的鑒別試驗結果與質量標準中的定相符,則可認為該項鑒別試驗符合規定”,或稱為“陽性反應”。化學鑒別法是藥物檢測中最常用的鑒別方法。化學鑒別法又分為一般鑒別試驗和專屬鑒別試驗。
一、一般鑒別試驗
般鑒別試驗是驗證藥物是否呈現某一離子或基團共有的化學反應在質量標準中,
一般描述為“本品顯某某鑒別反應”,如,“本品顯芳香第一胺類的鑒別反應本品顯氯化物的鑒別反應”。一般鑒別試驗只能證實供試品是否是某一類藥物,不是對未知藥物進行定性檢測。對無機藥物是根據其組成的陰、陽離子的特殊反應進行鑒別,對有機藥物則大都采用典型的官能團反應進行鑒別。
一般鑒別試驗的具體方法收載在《中國藥典》附錄中《中國藥典》二部附錄Ⅲ“一般鑒別試驗”中共收載了丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機氟化物類、無機金屬鹽類(如鈉鹽、鉀鹽)有機酸鹽類(如水楊酸鹽、枸橡酸鹽)等35個一般鑒別試驗項目。下面主要介紹其中具有代表性的6個鑒別試驗。
1.芳香第一胺類的鑒別
(1)方法:取供試品約50mg,加稀鹽酸1ml,要時緩緩煮沸使溶解,放冷,加0.1mol/L亞硝酸鈉溶液數滴,滴加堿性B-萘酚試液數滴,視供試品不同,生成由橙黃到猩紅色沉淀。
(2)原理:芳香第一胺類藥物或水解后能生成芳香第一胺類的藥物,均可與亞硝酸鈉發生重氮化反應,生成的重氮鹽與堿性B-萘酚形成偶氮化合物,視供試品不同,顏色從橙黃色到猩紅色。
2.水楊酸鹽的鑒別
(1)方法
1)取供試品的稀溶液,加三氯化鐵試液1滴,即顯紫色。
2)取供試品溶液,加稀鹽酸,即析出白色水楊酸沉淀;分離,沉淀在醋酸銨試液中溶解。
(2)原理:本品在中性弱酸性條件下,與三氯化鐵試液反應生成有色配位化合物、在中性時呈紅色,弱酸性時呈紫色。
在酸性條件下,本品生或在水溶液中微溶的有機酸水楊酸,析出白色沉淀;醋酸銨為強電解質,在水溶液中顯中性微溶的水楊酸在醋酸試液中能夠完全電離,從而溶解。
3.丙二酰脲類的鑒別
(1)方法
1)供試品約01g,加碳酸鈉試液m與水10ml2分鐘,濾過,濾液中逐滴加入硝酸試液,即生成白色沉淀,振搖,沉淀即溶繼續加過量的硝酸銀試液沉淀不再溶解。
2)取供試品約50mg,加溶液(1→10)5ml,溶解后,加銅試液1ml,即顯紫色或生成紫色沉淀。
(2)原理:巴比妥類藥物是丙二酰的衍生物,具有丙二酰的鑒別反應。
1)與硝酸銀的反應:丙二酰
在碳酸鈉試液中形成鈉鹽面溶解,再與硝酸銀試液作用,先生成可溶性的一銀鹽,繼而生成不溶性的二銀鹽白色沉淀。
2)與銅啶的反應:硫酸銅溶于水后,加吡啶,生成硫酸二吡啶銅,即為銅吡啶試液。丙二酰脲類能與銅啶試液作用而顯紫色或產生紫色沉淀。
4.鈉鹽的鑒別
(1)方法
1)取鉑絲,用鹽酸濕潤后,蘸取供試品,在無色火焰中燃燒,火焰即顯鮮黃色
2)取供試品約100mg,10ml試管中,加水2ml溶解,加15%碳酸鉀溶液2m,加熱至沸,應不得有沉淀生成;加焦銻酸鉀試液4ml,加熱至沸;置冰水中冷卻,必要時,用玻棒摩擦試管內壁,應有致密的沉淀生成。
(2)原理:在低溫條件下,鈉離子與焦銻酸鉀試液生成致密的沉淀物。2Na+k2h2Sb2O2→2k+na2H2Sb2O2↓
5.氯化物的鑒別
(1)方法
1)取供試品溶液,加稀硝酸使成酸性后,滴加硝酸銀試液,即生成白色凝乳狀沉淀;分離,沉淀加氨試液即溶解,再加稀硝酸酸化后沉淀復生成。如供試品為生物堿或其他有機堿的鹽酸鹽,須先加氨試液使成堿性,將析出的沉淀濾過除去,取濾液進行試驗。
2)取供試品少量,置試管中,加等量的二氧化錳,混勻,加硫酸濕潤,緩緩加熱,即發生氯氣,能使用水濕潤的碘化鉀淀粉試紙顯藍色。
(2)原理:在酸性條件下,氯離子與銀離子生成氯化銀白色凝乳狀沉淀,該沉淀與氨試液能發生配位反應,生成易溶的銀氨配離子化合物該配合物在酸性環境下配位平衡被破壞,生成游離態銀離子,與氯離子重新生成氯化銀白色凝乳狀沉淀。
二氧化錳具有氧化性,在酸性并加熱條件下能夠將氯離子氧化生成氯氣。氯氣能氧化濕潤碘化鉀淀粉試紙中碘化鉀,生成碘單質,使該試紙變藍。
6.硫酸鹽的鑒別
(1)方法
1)取供試品溶液,加入氯化試液產生白色沉淀,分離沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。
2)取供試品溶液,加入酸鉛試液產生白色沉淀,分離,沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解
(2)原理:硫酸根離子與鋇離子結合生成難溶的白色硫酸鋇沉淀。
硫酸根離子與鉛離子結合生成難溶的白色硫酸鉛沉淀,該沉淀與醋酸根離子發生配位反應,生成易溶于水的弱電解質醋酸鉛;若該沉淀處于過量堿性氫氧化鈉溶液中,會與氫氧根離子發生配位反應溶解,從而使沉淀消失。
二、專屬鑒別試驗
專屬鑒別試驗是根據藥物化學結構上某些基團所具有的特有化學性質和專屬反應而進行的鑒別試驗。專屬鑒別試驗收載在藥品質量標準正文中。
如氫溴酸山莨菪堿的鑒別方法為:取本品約10mg,加發煙硝酸5滴,置水浴上蒸干,得黃色殘渣放冷,加乙醇2～3滴濕潤加固體氫氧化鉀一小粒,即顯深紫色
該反應為維他立(Vili)反應,是阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿等含莨菪酸的托烷類生物堿的特征反應。供試品與發煙硝酸共熱,生成黃色三硝基(或二硝基)衍生物,冷卻至室溫后,遇醇制氫氧化鉀即生成深紫色的醌型化合物。又如,異煙鑒別方法為:取本品約10mg,置試管中,加水2ml溶解后,加氨制硝酸銀試液1ml,即發生氣泡與黑色渾濁,并在試管上生成銀鏡。
因為異煙肼結構中的肼基具有強還原性,與氨制硝酸銀試液反應,能夠將銀離子還原生成單質銀,發生銀鏡反應。
專屬鑒別試驗實例還可參閱本教材第八章各節內容,如維生素B1的硫色素反應、鹽酸氯丙嗪的硝酸氧化顯色反應等。
綜上所述,一般鑒別試驗是以某些類別藥物的共同化學結構為依據,根據其相同的物理化學性質進行藥物真偽的鑒別,以區別不同類別的藥物;而專屬鑒別試驗則是在一般鑒別試驗的基礎上,利用各種藥物的化學結構差異引起的性質差異來鑒別藥物是否具有特殊基團或特殊化學結構,達到最終確證藥物真偽的目的。
三、注意事項
1.進行鑒別試驗之前,必須明確鑒別試驗的工作要求,了解藥物的性質,掌握鑒別試驗的方法與原理。
2.所用儀器要求潔凈。試藥應符合《中國藥典二部附錄要求,試液除另有規定外,均應按規定的方法配制和貯藏。
3.供試品或供試品溶液的取用量應按各藥品項下的規定,固體供試品應研成細粉;液體供試品如果太稀可濃縮,如果太濃可稀釋。
4.試藥和試液的加入量、方法和順序均應符合各試驗項下的規定。如未作規定,試液應逐滴加入,邊加邊振搖,并注意觀察反應現象。
5.試驗中需要蒸發時,應置于蒸發皿中在水浴上進行。需分離沉淀時,采用離心機分離,經離心沉降后,用吸出法或傾瀉法分離沉淀。
6.對反應不夠靈敏的試驗,可用對照品進行對照試驗。
