Folin-酚法的實驗操作方法
標準曲線測定
取16支大試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其余試管分成兩組，分別加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升標準蛋白質(zhì)溶液（濃度為250mg/L）。用水補足到1.0毫升，然后每支試管加入5毫升試劑甲，在旋渦混合器上迅速混合，于室溫（20～25℃）放置10分鐘。再逐管加入0.5毫升試劑乙（Folin—酚試劑），同樣立即混勻。這一步混合速度要快，否則會使顯色程度減弱。然后在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對照，于700nm處測定各管中溶液的吸光度值。以蛋白質(zhì)的量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制出標準曲線。
注意：因Lowry反應(yīng)的顯色隨時間不斷加深，因此各項操作必須精確控制時間，即第1支試管加入5毫升試劑甲后，開始計時，1分鐘后，第2支試管加入5毫升試劑甲，2分鐘后加第3支試管，余此類推。全部試管加完試劑甲后若已超過10分鐘，則第1支試管可立即加入0.5毫升試劑乙，1分鐘后第2支試管加入0.5毫升試劑乙，2分鐘后加第3支試管，余此類推。待最后一支試管加完試劑后，再放置30分鐘，然后開始測定光吸收。每分鐘測一個樣品。
進行多試管操作時，為了防止出錯，每位學生都必須在實驗記錄本上預(yù)先畫好下面的表格。表中是每個試管要加入的量（毫升），并按由左至右，由上至下的順序，逐管加入。最下面兩排是計算出的每管中蛋白質(zhì)的量（微克）和測得的吸光度值。
樣品的測定
：取1毫升樣品溶液（其中約含蛋白質(zhì)20~250微克），按上述方法進行操作，取1毫升蒸餾水代替樣品作為空白對照。通常樣品的測定也可與標準曲線的測定放在一起，同時進行。即在標準曲線測定的各試管后面，再增加3個試管。如上表中的8、9、10試管。
根據(jù)所測樣品的吸光度值，在標準曲線上查出相應(yīng)的蛋白質(zhì)量，從而計算出樣品溶液的蛋白質(zhì)濃度。
注意，由于各種蛋白質(zhì)含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，顯色的深淺往往隨不同的蛋白質(zhì)而變化。因而本測定法通常只適用于測定蛋白質(zhì)的相對濃度（相對于標準蛋白質(zhì)）。
Folin-酚法測定蛋白質(zhì)含量原理
磷鉬酸和磷鎢酸在堿性條件下，易被酚類化合物還原而呈藍色反應(yīng)．蛋白質(zhì)中含有代酚基的酪氨酸，故有此反應(yīng)．Folin---酚法的靈敏度是雙縮脲法的100倍．
試劑
一：1，4%碳酸鈉；2，0.2N氫氧化鈉；3，1%硫酸銅；4,2%酒石酸鉀鈉。1和2等體積混合，3和4等體積混合，然后將兩液以50：1混合(甲)。當天使用。二：1NFolin--酚試劑(乙)。
方法
標準曲線；試管中加0、0.2、0.40、0.60、1.00毫升酪蛋白溶液（500微克/毫升），加水補足1毫升，平行做兩份。按序各加5毫升試劑（甲），搖勻，室溫置放10分鐘，再依次加入1N（0.5毫升）Folin----酚試劑（乙），搖勻，30攝氏度保溫30分鐘。然后在分光光度機上比色測定（A500）。待測樣品如上反應(yīng)和測定，對照標準曲線，得出含量。
注意
：酚和檸檬酸對測定有干擾，低濃度尿素，胍，硫酸鈉，硝酸鈉，三氯乙烯，乙醇，乙醚，丙酮對顯色無影響。
