蛋白質(zhì)含量測定法--考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）
本法系依據(jù)在酸性溶液中考馬斯亮藍(lán)G250與蛋白質(zhì)分子中的堿性氨基酸（精氨酸）和芳香族氨基酸結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物，在一定范圍內(nèi)其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度呈正比，以蛋白質(zhì)對照品溶液作標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用比色法測定供試品中蛋白質(zhì)的含量。
本法靈敏度高，通常可測定1～200μg的蛋白質(zhì)量。本法主要的干擾物質(zhì)有去污劑、Triton X-100、十二烷基硫酸鈉（SDS）等，供試品緩沖液呈強(qiáng)堿性時(shí)也會影響顯色。
試劑
酸性染色液
取考馬斯亮藍(lán)G250 0.1g，加乙醇50ml溶解后，加磷酸100ml，加水稀釋至1000ml，混勻。濾過，取濾液，即得。本試劑應(yīng)置棕色瓶內(nèi)，如有沉淀產(chǎn)生，使用前需經(jīng)濾過。
對照品溶液的制備
除另有規(guī)定外，取血清白蛋白（牛）對照品或蛋白質(zhì)含量測定國家標(biāo)準(zhǔn)品，加水溶解并制成每1ml中含1mg的溶液。
供試品溶液的制備
照各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法制備（蛋白質(zhì)濃度應(yīng)與對照品溶液基本一致）。
測定法
精密量取對照品溶液0.0ml、0.01ml、0.02ml、0.04ml、0.06ml、0.08ml、0.1ml（對照品溶液取用量可在本法測定范圍內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整），分別置具塞試管中，各加水至0.1ml，再分別加入酸性染色液5.0ml，立即混勻，照紫外-可見分光光度法（通則0401），立即在595nm的波長處測定吸光度；同時(shí)以0號管作為空白。以對照品溶液濃度與其相對應(yīng)的吸光度計(jì)算線性回歸方程。另精密量取供試品溶液適量，同法測定，從線性回歸方程計(jì)算供試品溶液中的蛋白質(zhì)濃度，并乘以稀釋倍數(shù)，即得。
【附注】本法測定時(shí)不可使用可與染色物結(jié)合的比色皿（如石英比色皿），建議使用玻璃比色皿或其他適宜材料的比色皿。
