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DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)

實(shí)驗(yàn)方法

做好 ChIP 的四個(gè)注意事項(xiàng)

染色質(zhì)免疫沉淀 (ChIP) 用于檢測(cè)細(xì)胞核中天然染色質(zhì)內(nèi)的蛋白質(zhì)與 DNA 之間的相互作用。ChIP 實(shí)驗(yàn)首先需要將細(xì)胞固定，即將蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用交聯(lián)固定到位。然后將染色質(zhì)打斷為片段，使用抗體對(duì)目的蛋白質(zhì)以及與其結(jié)合的所有 DNA 進(jìn)行免疫沉淀。最后，解交聯(lián)，對(duì)沉淀 DNA 進(jìn)行純化。純化的 DNA 可進(jìn)行進(jìn)一步的分析，如標(biāo)準(zhǔn)或?qū)崟r(shí) PCR、芯片或測(cè)序分析。

來(lái)源：CST 關(guān)鍵詞：ChIP; 免疫共沉淀; west-blot

原位雜交實(shí)驗(yàn)要求及步驟

　　原位雜交組織（或細(xì)胞）化學(xué) （In situ Hybridization Histochemistry，ISHH）簡(jiǎn)稱(chēng)原位雜交（In Situ Hybridization），屬于固相分子雜交的范疇，它是用標(biāo)記的DNA或RNA為探針，在原位檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)特定核酸序列的方法。根據(jù)所用探針和靶核酸的不同，原位雜交可分為DNA-DNA雜交，DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交三類(lèi)。

來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng) 關(guān)鍵詞：原位,雜交

什么是上下游引物

　引物（Primer）在聚合作用的起始時(shí)，可以刺激合成另一種大分子，并與反應(yīng)物以共價(jià)鍵形式連接的序列。在核酸化學(xué)中，引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結(jié)合在核酸鏈上與之互補(bǔ)的區(qū)域，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點(diǎn)，核酸聚合酶可由其3′端開(kāi)始合成新的核酸鏈。體外人工設(shè)計(jì)的引物被廣泛用于聚合酶鏈反應(yīng)、測(cè)序和探針合成等。

來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng) 關(guān)鍵詞：上游引物下游引物

生物素標(biāo)記蛋白操作方法

下面的操作方法可以使約3~5分子的生物素與1分子的蛋白結(jié)合，對(duì)某些蛋白來(lái)說(shuō)，生物素與蛋白的分子比可根據(jù)不同的生物素化要求進(jìn)行調(diào)整。

來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng) 關(guān)鍵詞：生物素蛋白

Southern 雜交操作步驟及注意事項(xiàng)

　　Southern 雜交是分子生物學(xué)的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是將待檢測(cè)的DNA樣品固定在固相載體上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號(hào)。通過(guò)Southern雜交可以判斷被檢測(cè)的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長(zhǎng)度。該項(xiàng)技術(shù)廣泛被應(yīng)用在遺傳病檢測(cè)、DNA指紋分析和PCR產(chǎn)物判斷等研究中。但由于該技術(shù)的操作比較煩瑣、費(fèi)時(shí)，所以現(xiàn)在有一些其他的方法可以代替Southern 雜交。但該技術(shù)也有它的獨(dú)特之處，是目前其他方法所不能替代的，如限制性酶切片段的多態(tài)性(RFLP)的檢測(cè)等。

來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng) 關(guān)鍵詞：Southern 雜交操作步驟注意事項(xiàng)

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